Test RT‑QUIC citlivě a rychle odhalí CJD
Ve vzorcích s nízkou koncentrací prionů je lze detekovat jen po inokulaci vzorku do mozku vnímavých laboratorních zvířat, což je nejen drahé, ale s ohledem na obecně velmi dlouhou inkubační dobu spongiformních encefalopatií také zdlouhavé. Nový typ testu publikovaný v předním lékařském časopisu Nature Medicine slibuje velmi rychlou, spolehlivou a ranou diagnostiku CJD.
Nejčastější formou CJD je sporadická, jež propuká z nepříliš jasných příčin zhruba u jednoho z milionu lidí, obvykle ve věku nad padesát let. Iatrogenní forma choroby byla prakticky vymýcena velmi důkladnou prevencí. V některých populacích se vyskytuje i dědičná forma CJD.
V poslední době vzbudila největší pozornost nová varianta nemoci (vCJD), vyvolaná přenosem prionů z konzumované nervové tkáně skotu nakaženého bovinní spongiformní encefalopatií (BSE). Výskyt vCJD je omezen především na britské ostrovy a počty obětí se vyšplhaly řádově na stovky. V souvislosti s jejím výskytem došlo v Británii několikrát k přenosu prionů např. transfuzí krve, což ještě zdůraznilo naléhavou potřebu rychlého, levného a spolehlivého testu schopného detekovat nízké koncentrace prionů v biologických vzorcích.
Jako všechny prionové choroby je i CJD vyvolána konverzí prionového proteinu PrPC na isomer PrPSc, který je rezistentní k rozkladu endogenními proteázami. Isomer PrPSc označovaný také jako prion se hromadí v nervové tkáni a působí toxicky na neurony. Zároveň prion slouží jako matrice pro konverzi dalších molekul PrPC na isomer PrPSc.
Tým vedený japonským mikrobiologem Ryuchihirem Atarashim z univerzity v Nagasaki vyvinul diagnostický postup CJD založený na technice označované jako RT‑QUIC . V testu nové metody byl analyzován mozkomíšní mok 18 pacientů s CJD a 35 pacientů trpících jiným neurodegenerativním onemocněním. Analýza vzorků netrvala déle než 48 hodin a nebyl při ní zaznamenán ani jeden falešně pozitivní výsledek.
Celkově byla CJD správně diagnostikována ve více než 83 % případů. Při současně provedeném stávajícím testu detekujícím protein 14‑3‑3, jenž je markerem pro sporadickou CJD, byla přesnost detekce 72 % a specificita dosáhla 85 procent. Klíčovým testem nové metody RT‑QUIC byla „slepá“ analýza třiceti vzorků mozkomíšního moku, které japonští mikrobiologové získali od kolegů z Austrálie. Specificita byla v tomto případě stoprocentní. Falešně pozitivní výsledek nebyl zaznamenán ani jednou. Správnost diagnózy byla 87,5 procenta. Testy na protein 14‑3‑3 dávaly podstatně víc falešně pozitivních výsledků.
Test RT‑QUIC využívá in vitro konverze PrPC na PrPSc. Jako matrice slouží molekuly prionů přítomné ve vzorku. Molekuly PrPC, které jsou dodány do reakce jako „substrát“, pocházejí z bakteriálně exprimovaného lidského genu pro PrPC. Reakce je silně urychlena třepáním.
Odtud také pochází její název real‑time quaking‑induced conversion – zkráceně RT‑QUIC . Výsledky, které se citlivostí vyrovnají zdlouhavým biologickým testům, lze pomocí RT‑QUIC získat do 48 hodin.
Metoda RT‑QUIC je využitelná i pro diagnostiku zvířecích přenosných spongiformních encefalopatií, jako je klusavka (skrapie) ovcí, BSE skotu nebo chorobné chřadnutí jelenovitých (CWD). Vyšetření lze provést na živých zvířatech, což má klíčový význam pro ozdravení chovů a zvýšení bezpečnosti potravin.
Výsledky, které publikoval Atarashi na svém předchozím Rocky Mountain Laboratories, naznačují, že se pro testy nemusí zdaleka používat jen mozkomíšní mok. U experimentálně nakažených křečků bylo možné detekovat priony s vysokou spolehlivostí i z nosního sekretu.
„Čím dříve jsme schopni odhalit infekci priony u člověka nebo zvířete, tím vyšší jsou naše šance, že zabráníme přenosu choroby z nakaženého jedince a že se nám podaří úspěšně léčit toho, kdo je nakažený,“ komentoval pro časopis Nature perspektivy využití metody RT‑QUIC jeden z jejích autorů Byron Caughey z Rocky Mountain Laboratories.
Zdroj: Medical Tribune